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        中腦核仁蛋白抗體生物素化標(biāo)記實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)
        更新時間:2022-05-05   點(diǎn)擊次數(shù):829次

        中腦核仁蛋白抗體生物素化標(biāo)記實(shí)驗(yàn)要點(diǎn):

        1.如在反應(yīng)混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會抑制標(biāo)記反應(yīng)。因此,蛋白質(zhì)在反應(yīng)前要對 0.1mol/L碳酸氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析;

        2.所用的NHSB及待生物素化蛋白質(zhì)之間的分子比按蛋白質(zhì)表面的ε-氨基的密度會有所不同,選擇不當(dāng)則影響標(biāo)記的效率,應(yīng)先用幾個不同的分子比來篩選最適條件;

        3.用NHSB量過量也是不利的,抗原的結(jié)合位點(diǎn)可能因此被封閉,導(dǎo)致抗體失活;

        4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此時可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等;

        5.當(dāng)游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)時,或位于酶的催化位點(diǎn)時,生物素化會降低或損傷抗體蛋白的結(jié)合力或活性;

        6.生物素還可能與不同的功能基團(tuán),如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及苯酚基,也可與糖基共價結(jié)合;

        7.交聯(lián)反應(yīng)后,應(yīng)充分透析,否則,殘余的生物素會對生物素化抗體與親和素的結(jié)合產(chǎn)生競爭作用;

        8.在細(xì)胞的熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對某些細(xì)胞可導(dǎo)致高本底。

        溫馨提示:

        在實(shí)驗(yàn)后,請注意回收稀釋的抗體。回收的抗體在進(jìn)行Western實(shí)驗(yàn)時至少可以重復(fù)使用10次。稀釋后的抗體,包括已經(jīng)使用過的稀釋抗

        體,4二保存。回收后重復(fù)使用的抗體,使用方法同新鮮稀釋的抗體。如果在重復(fù)使用過程中發(fā)現(xiàn)抗體出現(xiàn)輕微混濁現(xiàn)象,可以10000g離心

        1-3分鐘,取上清用于后續(xù)檢測。如果回收的抗體出現(xiàn)明顯的絮狀物或長需長菌等情況,則可以考慮廢棄該抗體。

        為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

        JNK相互作用蛋白4抗體

        氨基末端激酶1/2抗體

        氨基末端激酶1/2/3抗體

        氨基末端激酶1/3抗體

        連接蛋白JPH4抗體

        組蛋白去甲基轉(zhuǎn)移酶JMJD7抗體

        磷酸化原癌基因c-Jun抗體

        磷酸化活化蛋白激酶D抗體

        磷酸化活化蛋白激酶B抗體

        磷酸化活化蛋白激酶B抗體

        磷酸化組蛋白去甲基化酶JMJD2B抗體

        絲裂原活化蛋白激酶相互作用蛋白2抗體

        絲裂原活化蛋白激酶相互作用蛋白3抗體

        磷酸化氨基末端激酶1/2/3抗體

        磷酸化蛋白質(zhì)酪氨酸激酶JAK-1抗體

        氨基末端激酶2抗體

        連接介導(dǎo)調(diào)節(jié)蛋白抗體

        氨基末端激酶3抗體

        磷酸化活化蛋白激酶B抗體

        JmjC結(jié)構(gòu)域組蛋白去甲基化酶H3-K36抗體

        組蛋白去甲基化酶JARID2抗體

        JAK和微管相互作用蛋白2抗體

        活化蛋白激酶B抗體

        磷酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-2抗體

        凋亡細(xì)胞清除受體抗體

        磷酸化原癌基因c-Jun抗體

        Notch配體Jagged 2蛋白抗體


         

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