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        鰓霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒反應(yīng)五要素
        更新時間:2022-03-31   點擊次數(shù):739次

        鰓霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒反應(yīng)五要素:


        參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+


        引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:


        ①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。


        ②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。


        ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。


        ④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。


        ⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。


        ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。


        ⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。


        引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

        AKIRIN2蛋白抗體

        ADP核糖基化樣因子8B抗體

        三磷酸腺苷酶家族蛋白2抗體

        AKIRIN1蛋白抗體

        錨定蛋白樣蛋白1抗體

        腺苷酸激酶2抗體

        黑色素瘤缺失樣蛋白1抗體

        未知糖基化轉(zhuǎn)移酶AER61抗體

        鐵蛋白Fe65抗體

        抑癌基因ras同源家族1抗體

        轉(zhuǎn)錄激活蛋白2α/TFAP2α/AP-2α抗體

        心鈉素抗體

        丙氨酰tRNA合成酶2抗體

        絲氨酸抑制蛋白激酶C底物抗體

        核突觸蛋白α抗體

        自噬相關(guān)蛋白4B抗體

        整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-12抗體

        α-輔肌動蛋白4(內(nèi)參)抗體

        堿性磷酸酶抗體

        AU1 tag標(biāo)簽抗體

        脂肪細胞增強結(jié)合蛋白1

        蛋白激酶B

        蛋白激酶B

        血管生成素樣蛋白2抗體

        血管生成素3/血管生成素4抗體

        膜粘連蛋白 I抗體

        膜粘連蛋白 Ⅱ抗體

        活化轉(zhuǎn)錄因子1抗體

        水通道蛋白4抗體


         

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