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        猴痘病毒PCR檢測試劑盒使用方法
        更新時(shí)間:2021-03-17   點(diǎn)擊次數(shù):1195次

        猴痘病毒PCR檢測試劑盒使用方法:
        一、樣品 RNA 的制備
        1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司的一管式病毒 RNAout
        2、或柱式病毒 RNAout。
        二:RT(逆轉(zhuǎn)錄)反應(yīng)合成 cDNA
        1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系(20 μL 體系)
        2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
        3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),
        反應(yīng)終體積為 20μL。
        4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
        5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng),然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。

        檢測程序:
        1.  加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 100ul ,將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
        2.  洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,向?yàn)V紙上印干。
        3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
        4.  洗板:同前。
        5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
        6.  洗板:同前。
        7.  每孔加入底物工作液100ul ,置 37   ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。
        8.  每孔加入100ul 終止液混勻。
        9.  30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0 nm 處測 吸光值。

         

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