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        大鼠6-酮前列腺素酶聯(lián)免疫 操作步驟
        更新時(shí)間:2019-05-28   點(diǎn)擊次數(shù):1034次

        大鼠6-酮前列腺素F1α (6-keto-PGF1α)酶聯(lián)免疫分析

        操作步驟
        1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
        釋。
        80ng/mL 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
        40ng/mL 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
        20ng/mL 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
        10ng/mL 2 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
        5ng/mL 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
        2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、
        待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,
        然后再加待測樣品 10μl(樣品*終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡
        量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
        3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。 
        4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
        5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
        重復(fù) 5 次,拍干。
        6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。
        7. 溫育:操作同 3。
        8. 洗滌:操作同 5。
        9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
        15 分鐘.
        10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
        11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止
        液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
        操作程序總結(jié):
        計(jì)算
        以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的
        OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo)
        準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),
        即為樣品的實(shí)際濃度。

         

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