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        ELISA競(jìng)爭(zhēng)抑制法基本操作問(wèn)題分析
        更新時(shí)間:2017-02-14   點(diǎn)擊次數(shù):1840次

        ELISA競(jìng)爭(zhēng)抑制法基本操作問(wèn)題分析

        ELISA試劑盒SCI文章兩對(duì)半使用elisa方法,其中HBSAg、HBsAb、HBeAg使用雙抗原/抗體夾心法檢測(cè),而HBcAb、HBeAb使用競(jìng)爭(zhēng)抑制法檢測(cè)。 而競(jìng)爭(zhēng)抑制法的原理:酶標(biāo)抗體與樣本抗體在同樣的體系中,與固相抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合是等比關(guān)系。原論上講,應(yīng)該先將樣本與酶標(biāo)抗體先行混勻,然后加入反應(yīng)也進(jìn)行。但實(shí)際工作中并非如此,都是分開(kāi)加入反應(yīng)孔。這樣會(huì)造成先加入的先結(jié)合,與后加入者并不是公平的關(guān)系,因而也不符合等比原則。特別是在放置時(shí)間長(zhǎng),且溫度高的情況下,對(duì)結(jié)果有很大的影響。

        將陰性標(biāo)本94份并用生理鹽水進(jìn)行1:30稀釋?zhuān)?a >ELISA試劑盒SCI文章在加入標(biāo)本后按下表時(shí)間放置后再加入酶標(biāo)抗體,然后檢測(cè)結(jié)果如下:

        放置時(shí)間(min)陰性標(biāo)本數(shù)臨界值-標(biāo)本A450nm值假陽(yáng)性率(%)<0.30.3~0.7>0.70751036026813767.4565158610.6105616121020.2203818172139.3302112184357.4

        ELISA試劑盒SCI文章從上表可以看出,如果同時(shí)加入標(biāo)本與酶標(biāo)抗體,沒(méi)出現(xiàn)假陽(yáng)性現(xiàn)象。2分鐘后再加入酶標(biāo)抗體,由于標(biāo)本比酶標(biāo)抗體先結(jié)合了兩分鐘,因此出現(xiàn)了7.4%的假陽(yáng)性。30分鐘后再加,假陽(yáng)性高達(dá)57.4%。因此建議競(jìng)爭(zhēng)抑制法的項(xiàng)目,加十個(gè)樣本后立即加酶標(biāo)抗體,這樣對(duì)檢測(cè)結(jié)果沒(méi)有影響。

         

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